《生物资源》编辑部 -->实验技术与方法

以4-香豆酸为底物转化白藜芦醇大肠杆菌工程菌的构建

翟逸，李明，赵秀敏，张晓利，南化征，蒋龙声，江旭，阮志勇 — 2021/4/19 11:09:08

白藜芦醇具有多种生物活性，在食品、化妆品及生物制药中具有广阔的应用前景。利用合成生物学生产白藜芦醇是未来的发展趋势。将白藜芦醇合酶（resveratrol synthase，RS）和4-香豆酰-CoA连接酶（4-coumaric acid-CoA ligase，4CL）的编码基因整合到共表达载体pETDuet-1上成功构建了重组质粒pETDuet-rs-4cl，转化大肠杆菌BL21（DE3），在M9培养基中添加4-香豆酸，在诱导条件下培养，发酵液中白藜芦醇含量为8.6 mg/L。本研究在大肠杆菌中实现了白藜芦醇的转化，为微生物法生产白藜芦醇奠定了基础。

基于非靶代谢组学多刺绿绒蒿不同器官代谢物差异分析

丁亚丽 — 2022/11/11 10:33:56

为了进一步探究传统藏药植物多刺绿绒蒿（Meconopsis horridula）中代谢物成分以及不同器官差异情况，采用UPLC-MS技术对多刺绿绒蒿的叶、根和花三个不同器官代谢物进行分析与鉴定。并利用主成分分析（PCA）、聚类热图分析、正交偏最小二乘-判别分析（OPLS-DA）和KEGG通路富集分析等方法进行不同器官差异代谢产物筛选与通路分析。结果显示，在ESI⁺和ESI^-模式下，共检测注释到947种代谢物，不同器官间差异代谢物进行分析，叶和根差异代谢物有301个，叶和花中差异代谢物有170个，根和花中差异代谢物有244个。通过聚类热图可以看出，大多数代谢物在根中含量较低；KEGG通路富集分析显示，差异代谢物大多富集在氨基酸代谢、花青素生物合成、黄酮类生物合成和生物碱合成等代谢途径。各器官优势黄酮类、萜类和生物碱类代谢物的分析为进一步探究多刺绿绒蒿的不同器官药用特征成分和开发利用提供一定的帮助。

麻城福白菊“一种二改三调”生态种植模式研究

刘大会，廖致远，刘启，鲍五洲，蒋静怡，王明辉，苗玉焕，马毅平，鲍江峰 — 2022/11/11 10:34:01

以湖北省麻城市福白菊传统种植模式中存在的问题为导向，总结归纳出福白菊轻简种植新模式，并阐明该模式在福白菊生产过程中解决的生态问题。通过实地调研以及课题组在福白菊种植方面的相关研究经验，在传统种植方式的基础上进行改进和修正、归纳福白菊种植模式的技术要点，并在麻城进行示范推广，探讨该种植模式的可行性。本模式的核心技术主要包括，“选择优良地方品种”（一种）；“改传统老枝分株苗或老枝扦插苗为穴盘嫩枝扦插育苗 ”和“改单一连作模式为轮、间作模式”（二改）；“调整定植时期”“调整种植密度”和调整施肥模式”（三调）的“一种二改三调”的生态种植模式。该模式在一定程度上解决了福白菊在传统种植模式中存在的病害严重、产质量不高问题，提供了菊花药材优质增产增效的有效手段，对福白菊的“三品一标”种植和经济效益的提高具有指导意义。

海南黎药蛇王藤质量标准研究

蒋子肖，陈兰，冯剑，侯文成，刘洋洋 — 2022/11/11 10:34:11

为制定海南黎药蛇王藤的质量标准，依据《中华人民共和国药典》2020年版质量检定的基本原则为指导，采用性状观察法、显微观察法、薄层色谱法、烘干法、总灰分测定法、醇溶性热浸法分别研究蛇王藤的性状和显微结构特征、薄层色谱鉴别、水分、总灰分以及醇溶性浸出物。本研究明确了蛇王藤药材的性状和显微结构特征，建立了薄层鉴别方法；规定蛇王藤药材水分不得超过12.0%、总灰分不得超过7.0%、水溶性浸出物不得少于8.0%。本研究制定的蛇王藤药材质量标准可为该药材的质量控制提供依据。

基于转录组数据藏波罗花WRKY转录因子鉴定与表达分析

张文才，吴玄峰，朱攀，刘星 — 2022/11/11 10:34:00

为了解在藏波罗花中转录因子WRKY基因家族的结构和组织特异性表达情况，进而为其特征成分萜类化合物的合成与调控提供一定的借鉴，本研究从藏波罗花的转录组数据中共鉴定出了38个WRKY转录因子，进行生物信息学分析。根据WRKY转录因子保守结构域将38个藏波罗花WRKY转录因子分为三类（Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ），长度为115~623。表达量分析结果表明，有16个转录因子在叶和根中差异表达，其中10个在叶中显著上调，6个在根中显著上调。选取了5条WRKY转录因子进行qRT-PCR验证，结果与转录组数据相一致，表明转录组数据可靠。这些在藏波罗花中不同组织之间的差异WRKY转录因子可能在应对极端环境和介导组织特异性次生代谢产物方面发挥作用，这也为后续探究植物在应对高海拔极端环境和次生代谢产物的合成与积累提供一定的帮助。

P75^NTR在绒山羊毛囊生长周期中的表达

张焕琪，马桂霞，王春强，马巍 — 2023/3/7 16:29:45

实验旨在研究绒山羊（Capra hircus）毛囊生长相关基因的表达规律，为绒山羊分子育种提供参考。本实验采用RT-PCR、组织免疫荧光、Western blot等方法，研究神经营养素受体P75^NTR在辽宁绒山羊皮肤组织中的表达和分布情况。结果表明：在毛囊生长周期的三个时期，均监测到P75^NTR mRNA及蛋白的存在，P75^NTR的荧光信号在退行期要强于其他两个时期，且在退行期毛囊外根鞘细胞中检测到P75^NTR的高表达。以上结果表明，P75^NTRmRNA及蛋白的表达与毛囊生长周期变化有一定的相关性，P75^NTR受体在绒山羊的毛囊周期性变化中发挥着重要的功能。

基于高通量和传统培养法分析白首乌根际真菌多样性

李洁，林莹，徐美玉，王飞，徐凌川 — 2023/3/7 16:29:46

探讨白首乌根际土壤真菌群落组成结构与分布规律，为优选根际促生菌、提高仿野生种植技术提供科学理论依据。综合Illumina MiSeq高通量测序技术和传统分离培养技术，分析测定3个产地2个根茎深度的白首乌根际土壤真菌群落的丰富度和多样性，分离鉴定可培养根际真菌的种类。6个样品共得到真菌1 589个OTUs，分属于11门35纲84目142科237属，子囊菌门（Ascomycota）和被孢霉门（Mortierellomycota）是样品共同的优势菌门；6个样品通过传统培养法共分离得到103个形态型，分为3门8纲10目12科16属37种，优势菌属为木霉属（Trichoderma）和镶刀菌属（Fusarium）。综合比较，高通量测序技术可以得到更全面的菌落数据，传统分离培养技术可以纯化出适应性强的菌株；不同产地和根茎深度样品间土壤真菌群落存在显著差异性。

基于流式细胞术构建慢性粒细胞白血病的诊断模型

马耀坤，商芳影，宋亮亮，马斌，刘钰，陈琼，刘万红 — 2024/9/11 9:57:25

流式细胞术的免疫分析在恶性血液病诊断中发挥着重要作用。然而在慢性粒细胞白血病慢性期（chronic myeloid leukemia in chronic phase，CML-CP）的诊断中，流式细胞术主要作为辅助诊断手段。本研究使用流式细胞术分析了500例CML-CP样本和106例非CML样本的免疫分析数据，采用统计学分析方法对CML组和非CML组进行显著性检验，并通过logistic回归构建诊断模型。结果显示，CML组和非CML组在Neu%、Baso%、CD10⁺%、CD38⁺%、CD56⁺%、CD64⁺CD16^-%、CD15⁺CD11b⁺%和Eos%等标志物上存在显著差异（p<0.01）；并利用步进法构建出CMLflowscore诊断公式，该公式除常数外由5个指标构成，其受试者操作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线下面积为0.989，灵敏度为98.0%，特异性为96.2%。值得注意的是，本研究发现了CML-CP在流式细胞诊断过程中的潜在诊断标志物，并构建了新的诊断公式，这些发现可以让流式细胞术在CML-CP的初次诊断中发挥关键作用。

热带药材虎乳灵芝质量标准建立

张梓杰，冯剑，何明军，徐林，刘洋洋 — 2024/9/11 9:57:28

制定热带药材虎乳灵芝的质量标准。该研究对虎乳灵芝药材的性状、显微结构和薄层色谱特征进行了定性鉴别，参照《中国药典》2020年版测定其水分、总灰分、浸出物含量，并采用紫外分光光度法对总多糖等含量指标进行测定。规定虎乳灵芝药材水分含量不得超过13.0%、总灰分不得超过2.0%、水溶性浸出物含量不得少于3.0%；以无水葡萄糖作对照，虎乳灵芝药材总多糖含量不得少于0.45%。通过研究，建立了虎乳灵芝专属性薄层，创新了显微鉴别方法，并制定了虎乳灵芝药材标准。该研究方法重现性好，简便高效，可用于热带药材虎乳灵芝的质量控制，为进一步控制虎乳灵芝药材质量、研究与开发虎乳灵芝提供了参考。

基于DNA条形码技术鉴定库尔勒机场的蝙蝠物种

陈曦，丁鹏，高为震，梁倩如，时磊 — 2024/4/30 13:19:39

随着航空业的发展，野生动物与航空器之间的冲突愈演愈烈，研究机场周边飞行动物对机场动物撞击防范工作具有重要意义。蝙蝠作为世界上唯一的飞行类哺乳动物，也是严重影响夜间飞机飞行安全的隐患之一，但由于蝙蝠体型较小，发生撞击后往往无法发现相对完整的尸体，多为血液和毛发等，因此物种鉴定比较困难。从库尔勒机场防鸟网采集到一具蝙蝠样本，基于DNA条形码技术（DNA barcoding），通过16S rRNA遗传距离分析，发现棕蝠属（Eptesicus）与库尔勒样本群体间遗传距离为0.031~0.092，属内与库尔勒样本种间差异最大的是南美棕蝠（Eptesicus diminutus），遗传距离为0.092；差异最小的是大棕蝠（Eptesicus serotinus），遗传距离为0.031。结合形态学分析并通过解剖证实该个体的性腺尚未发育，确定了库尔勒机场挂网蝙蝠物种为大棕蝠。本研究为机场不易辨认或者保存不完整样本的物种鉴定提供方法依据。在确定物种后，了解其生活史特征，有利于机场动物撞击防范工作的精准实施，从而最大限度降低机场损失。

海南习用药材酸藤子的质量标准研究

庄重，沈青，邱秀儒，刘洋洋，李文兰 — 2024/3/15 9:47:35

为了制定海南习用药材酸藤子的质量标准，以2020年版《中国药典》质量鉴定基本原则为指导，采用性状观察法、显微观察法、薄层色谱法、烘干法、总灰分测定法、水溶性热浸法、紫外-可见分光光度法分别研究酸藤子的性状和显微结构特征，水分、总灰分、水溶性浸出物以及总黄酮含量。明确了酸藤子性状和显微结构特征，建立了其薄层鉴别方法；拟规定酸藤子药材水分不得超过13.0%，总灰分不得超过12.0%，水溶性浸出物含量不得少于20.0%，总黄酮含量不得少于1.3%。初步拟定了海南习用药材酸藤子质量标准，为酸藤子进一步的质量控制和药用开发提供参考。

铁皮石斛DobHLH33转录因子启动子的克隆及表达分析

杨莎，黄园，陈春伶，王健，陈晓凯，陈宏宇，孙庆文 — 2024/3/15 9:47:38

为初步探究碱性螺旋-环-螺旋（basic helix-loop-helix， bHLH）家族成员DobHLH33基因在铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）中的生物学功能，本研究从铁皮石斛中克隆了DobHLH33基因的启动子序列。结果显示，克隆出DobHLH33基因起始密码子上游启动子序列1 821 bp，经PlantCARE预测分析该序列包含逆境胁迫顺式作用元件、光响应元件、激素响应元件、TATA-box、CAAT-box和CAAT-box核心启动子元件等。构建了DobHLH33启动子的β-葡萄糖苷酸酶（β-glucuronidase， GUS）融合表达载体并通过花序浸染获得拟南芥转基因植株。GUS染色结果显示，该启动子能够驱动GUS基因在幼苗及各器官部位叶、花、果、柱头、花粉和叶脉中表达，其中在幼苗中表达最强；转基因幼苗在甘露醇和氯化钠胁迫下，DobHLH33启动子活性受诱导，转基因幼苗GUS染色明显加深。综上所述，DobHLH33可能参与铁皮石斛生长发育以及高盐和渗透胁迫响应，为铁皮石斛bHLH家族的功能研究提供基础和参考依据。